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ANR Project DEMETER
SEEK ID: https://research-sharing.cesgo.org/projects/15
Public web page: http://www.versailles-grignon.inra.fr/Toutes-les-actualites/201608-Projet-Demeter
Organisms: Xenopus laevis
CesGO PALs: No PALs for this Project
Project created: 9th May 2018
Related items
- People (3)
- Institutions (2)
- Investigations (2)
- Studies (3)
- Assays (20)
- Data files (16)
- SOPs (3+1)
- Organisms (1)
- Samples (1)
Disciplines: Not specified
Roles: Not specified
Expertise: Not specified
Tools: Not specified
Projects: CORAIL MAD, DEMETER
Institutions: Centre de Ressources Biologiques Xénopes - UMS 3387
Disciplines: Experimentalist
Roles: Not specified
Expertise: cellular biology, Oocyte, Animal science, Xenopus laevis
Tools: Pharmacology and toxicology, Single Cell analysis, Cell and tissue culture, Electrophysiology, Ecotoxicology
Projects: CORAIL MAD, DEMETER
Institutions: Centre de Ressources Biologiques Xénopes - UMS 3387
Disciplines: Experimentalist
Roles: Not specified
Expertise: Animal science, cellular biology, Molecular Biology
Tools: Cell and tissue culture, Molecular Biology, Single Cell analysis, Genomics, PCR, Microarray analysis, Pharmacology and toxicology
-Le choix du système d'expression hétérologue ovocytaire a été fait afin de déorphaniser un maximum de récepteurs olfactifs identifiés chez l'adulte et la chenille de Spodoptera littoralis.
-Pour réaliser un screening moyen débit un robot de Two Electrode Voltage Clamp est utilisé (HiClamp, MultichanelSystem).
Snapshots: No snapshots
Afin de s'assurer de l'intégrité des plasmides pCS2+ injectés dans les ovocytes nous avons eu recours à un séquençage Sanger.
Snapshots: No snapshots
Studies: Analyse des plasmides pCS2+
Assays: PCR sur plasmides pCS2+_ORs, Séquençage
- Les ovocytes sont prélevés sur l'animal par laparotomie.
- Les ovocytes sont conservés dans un milieu salin physiologique à 16°C-18°C
- Les ovocytes sont injectés avec le matériel génétique (ADN, ARN) codant pour les protéines membranaires souhaitées.
Person responsible: Guillaume Audic
Snapshots: No snapshots
Investigation: Etude d'expression ovocytaire
Assays: Défollicularisation, HiClamp, Microinjection d'ovocytes, Prélèvement 1
-On procède à une PCR des plasmides avec des amorces designées en amont et en aval de la zone d'insert en se basant sur les séquences communiquées par Nicolas MONTAGNE (INRA Versailles).
-Ces produits de PCR sont envoyés pour un séquençage Sanger à la plateforme de l'IGDR (Stéphane DREANO)
Person responsible: Guillaume Audic
Snapshots: No snapshots
Investigation: Biologie moléculaire
Assays: PCR sur plasmides pCS2+_ORs, Séquençage
Criblage d'ovocytes exprimant les récepteurs olfactifs de Spodoptera littoralis
Contributor: Guillaume Audic
Assay type: Electrophysiology
Technology type: Two Electrode Voltage Clamp
Snapshots: No snapshots
Investigation: Etude d'expression ovocytaire
Study: Préparation et conservation des ovocytes
Organisms: No organisms
SOPs: 1 hidden item
Data files: No Data files
Microinjection des ovocytes avec de l'ADN SlitOR, coinjecté avec l'ADN SlitORco et un marqueur ADN GFP
Contributor: Guillaume Audic
Assay type: Experimental Assay Type
Technology type: Technology Type
Snapshots: No snapshots
Investigation: Etude d'expression ovocytaire
Study: Préparation et conservation des ovocytes
Organisms: No organisms
SOPs: Microinjection ovocytes X.laevis
Data files: No Data files
Digestion enzymatique des fragments pour obtenir des ovocytes défolliculés prêts à être injectés
Contributor: Guillaume Audic
Assay type: Experimental Assay Type
Technology type: Technology Type
Snapshots: No snapshots
Investigation: Etude d'expression ovocytaire
Study: Préparation et conservation des ovocytes
Organisms: No organisms
SOPs: 1 hidden item
Data files: No Data files
Prélèvement sur femelles (num lot :RRTL251011 TF5)
Date : 28/05/2018
Contributor: Guillaume Audic
Assay type: Experimental Assay Type
Technology type: Technology Type
Snapshots: No snapshots
Investigation: Etude d'expression ovocytaire
Study: Préparation et conservation des ovocytes
Organisms: No organisms
SOPs: Récupération de fragments d'ovaires
Data files: No Data files
Données de criblage obtenues pour l'ORco
Contributor: Guillaume Audic
Assay type: Electrophysiology
Technology type: Two Electrode Voltage Clamp
Snapshots: No snapshots
Investigation: Etude d'expression ovocytaire
Study: Criblage SlitOR vs ligands
Organisms: No organisms
SOPs: No SOPs
Data files: No Data files
Protoccole décrivant les différentes étapes pour microinjecter des construction ADN ou ARN dans l'ovocyte de Xénope
Creator: Guillaume Audic
Contributor: Guillaume Audic
Investigations: Etude d'expression ovocytaire
Studies: Préparation et conservation des ovocytes
Assays: Microinjection d'ovocytes
Protocole décrivant la pratique de l'anesthésie des femelles, la laparotomie
Creator: Guillaume Audic
Contributor: Guillaume Audic
Investigations: Etude d'expression ovocytaire
Studies: Préparation et conservation des ovocytes
Assays: Prélèvement 1
>Utilisation de la TaqDNA Polymérase 5,000 U/ml NEB Biolabs
Préparation du Mastermix :
pour 1 réaction = Taq Ready Mix 12,5µl
Primer F 1,25µl
Primer R 1,25µl
ADN matrice qsp 0,05µg/µl
Eau DEPC qsp 25µl
>Programme du thermocycleur :
-Heat lid 105°C
-Dénaturation initiale 95°C 5minutes
30 cycles de PCR :
-Dénaturation 94°C 30secondes
-Hybridation 54°C 45secondes
-Elongation 72°C 2minutes
-Elongation terminale 72°C 5minutes
Creator: Guillaume Audic
Contributor: Guillaume Audic
Investigations: Biologie moléculaire
Studies: Analyse des plasmides pCS2+
Assays: PCR sur plasmides pCS2+_ORs
Taxonomy URI: http://purl.bioontology.org/ontology/NCBITAXON/8355
Synonyms: Bufo laevis, common platanna, platanna