DEMETER
OverviewANR Project DEMETER
SEEK ID: https://research-sharing.cesgo.org/projects/15
Public web page: http://www.versailles-grignon.inra.fr/Toutes-les-actualites/201608-Projet-Demeter
Organisms: Xenopus laevis
CesGO PALs: No PALs for this Project
Project created: 9th May 2018
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Projects: CORAIL MAD, DEMETER
Institutions: Centre de Ressources Biologiques Xénopes - UMS 3387
Projects: CORAIL MAD, DEMETER
Institutions: Centre de Ressources Biologiques Xénopes - UMS 3387
https://orcid.org/0000-0002-6904-2036 
-Le choix du système d'expression hétérologue ovocytaire a été fait afin de déorphaniser un maximum de récepteurs olfactifs identifiés chez l'adulte et la chenille de Spodoptera littoralis. -Pour réaliser un screening moyen débit un robot de Two Electrode Voltage Clamp est utilisé (HiClamp, MultichanelSystem).
Submitter: Guillaume Audic
Studies: Criblage SlitOR vs ligands, Préparation et conservation des ovocytes
Assays: Défollicularisation, HiClamp, Microinjection d'ovocytes, Prélèvement 1, SlitOR15, SlitOR16, SlitOR18, SlitOR20, SlitOR22, SlitOR23, SlitOR27, SlitOR28, SlitOR3, SlitOR31, SlitOR35, SlitOR4, SlitOR9, SlitORco
Afin de s'assurer de l'intégrité des plasmides pCS2+ injectés dans les ovocytes nous avons eu recours à un séquençage Sanger.
Submitter: Guillaume Audic
Studies: Analyse des plasmides pCS2+
Assays: PCR sur plasmides pCS2+_ORs, Séquençage
- Les ovocytes sont prélevés sur l'animal par laparotomie.
- Les ovocytes sont conservés dans un milieu salin physiologique à 16°C-18°C
- Les ovocytes sont injectés avec le matériel génétique (ADN, ARN) codant pour les protéines membranaires souhaitées.
Submitter: Guillaume Audic
Investigation: Etude d'expression ovocytaire
Assays: Défollicularisation, HiClamp, Microinjection d'ovocytes, Prélèvement 1
-On procède à une PCR des plasmides avec des amorces designées en amont et en aval de la zone d'insert en se basant sur les séquences communiquées par Nicolas MONTAGNE (INRA Versailles). -Ces produits de PCR sont envoyés pour un séquençage Sanger à la plateforme de l'IGDR (Stéphane DREANO)
Submitter: Guillaume Audic
Investigation: Biologie moléculaire
Assays: PCR sur plasmides pCS2+_ORs, Séquençage
Réalisation de PCR sur les pCS2+_SlitOR disponible au CRB Xénopes : OR3 ; OR4 ; OR5 ; OR9; OR11 ; OR13 ; OR15 ; OR16 ; OR18 ; OR20 ; OR22 ; OR23 ; OR24 ; OR27 ; OR28 ; OR314 ; OR35 ; ORco
Submitter: Guillaume Audic
Assay type: Experimental Assay Type
Technology type: PCR
Investigation: Biologie moléculaire
Study: Analyse des plasmides pCS2+
Séquençage Sanger réalisé par la plateforme de l'IGDR Utilisation de la technique du BigDye
Submitter: Guillaume Audic
Assay type: DNA Sequencing
Technology type: Sequencing
Investigation: Biologie moléculaire
Study: Analyse des plasmides pCS2+
Données de criblage obtenues pour l'OR4
Submitter: Guillaume Audic
Assay type: Electrophysiology
Technology type: Two Electrode Voltage Clamp
Investigation: Etude d'expression ovocytaire
Study: Criblage SlitOR vs ligands
Données de criblage obtenues pour l'OR3
Submitter: Guillaume Audic
Assay type: Electrophysiology
Technology type: Two Electrode Voltage Clamp
Investigation: Etude d'expression ovocytaire
Study: Criblage SlitOR vs ligands
Données de criblage obtenues pour l'OR9
Submitter: Guillaume Audic
Assay type: Electrophysiology
Technology type: Two Electrode Voltage Clamp
Investigation: Etude d'expression ovocytaire
Study: Criblage SlitOR vs ligands
Protoccole décrivant les différentes étapes pour microinjecter des construction ADN ou ARN dans l'ovocyte de Xénope
Creator: Guillaume Audic
Submitter: Guillaume Audic
DownloadProtocole décrivant la pratique de l'anesthésie des femelles, la laparotomie
Creator: Guillaume Audic
Submitter: Guillaume Audic
Utilisation de la TaqDNA Polymérase 5,000 U/ml NEB Biolabs Préparation du Mastermix : pour 1 réaction = Taq Ready Mix 12,5µl Primer F 1,25µl Primer R 1,25µl ADN matrice qsp 0,05µg/µl Eau DEPC qsp 25µl Programme du thermocycleur : -Heat lid 105°C -Dénaturation initiale 95°C 5minutes 30 cycles de PCR : -Dénaturation 94°C 30secondes -Hybridation 54°C 45secondes -Elongation 72°C 2minutes -Elongation terminale 72°C 5minutes
Creator: Guillaume Audic
Submitter: Guillaume Audic
