Biologie moléculaire
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Afin de s'assurer de l'intégrité des plasmides pCS2+ injectés dans les ovocytes nous avons eu recours à un séquençage Sanger.
SEEK ID: https://research-sharing.cesgo.org/investigations/48
Projects: DEMETER
Investigation position:
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Created: 14th May 2018 at 07:00
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Projects: CORAIL MAD, DEMETER
Institutions: Centre de Ressources Biologiques Xénopes - UMS 3387
ANR Project DEMETER
-On procède à une PCR des plasmides avec des amorces designées en amont et en aval de la zone d'insert en se basant sur les séquences communiquées par Nicolas MONTAGNE (INRA Versailles). -Ces produits de PCR sont envoyés pour un séquençage Sanger à la plateforme de l'IGDR (Stéphane DREANO)
Submitter: Guillaume Audic
Investigation: Biologie moléculaire
Assays: PCR sur plasmides pCS2+_ORs, Séquençage
Réalisation de PCR sur les pCS2+_SlitOR disponible au CRB Xénopes : OR3 ; OR4 ; OR5 ; OR9; OR11 ; OR13 ; OR15 ; OR16 ; OR18 ; OR20 ; OR22 ; OR23 ; OR24 ; OR27 ; OR28 ; OR314 ; OR35 ; ORco
Submitter: Guillaume Audic
Assay type: Experimental Assay Type
Technology type: PCR
Investigation: Biologie moléculaire
Study: Analyse des plasmides pCS2+
Séquençage Sanger réalisé par la plateforme de l'IGDR Utilisation de la technique du BigDye
Submitter: Guillaume Audic
Assay type: DNA Sequencing
Technology type: Sequencing
Investigation: Biologie moléculaire
Study: Analyse des plasmides pCS2+
Utilisation de la TaqDNA Polymérase 5,000 U/ml NEB Biolabs Préparation du Mastermix : pour 1 réaction = Taq Ready Mix 12,5µl Primer F 1,25µl Primer R 1,25µl ADN matrice qsp 0,05µg/µl Eau DEPC qsp 25µl Programme du thermocycleur : -Heat lid 105°C -Dénaturation initiale 95°C 5minutes 30 cycles de PCR : -Dénaturation 94°C 30secondes -Hybridation 54°C 45secondes -Elongation 72°C 2minutes -Elongation terminale 72°C 5minutes
Creator: Guillaume Audic
Submitter: Guillaume Audic
